Las proteínas del plasma seminal incrementan la viabilidad espermática post-descongelación del semen de toros Sanmartinero

RESUMEN Objetivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la adición de proteínas del plasma seminal sobre el porcentaje de espermatozoides bovinos viables post-descongelación. Materiales y métodos. Los espermatozoides se congelaron usando dos medios (citrato-fructosa-yema y Bioxcell®) y la obtención de proteínas de plasma seminal de bajo peso molecular se realizó por medio de cromatografía líquida de baja presión. Las proteínas de interés eluyeron en las fracciones 21-25 y se sometieron a electroforésis en una y dos dimensiones. Los espermatozoides se incubaron a 37°C durante una hora, con 0.5, 1.0, 1.5 y 2.0 mg de la fracción 21-25. Se incluyeron dos tratamientos adicionales: uno con proteínas totales del plasma seminal y otro sin proteína. Resultados. La electroforésis bidimensional de las fracciones confirmó la presencia de siete puntos de proteína de bajo peso molecular (14-16 kDa y punto Isoeléctrico de 5.0 - 5.5). La adición de estas proteínas aumentó 20% (p<0.05), el porcentaje de espermatozoides viables post-descongelación en muestras congeladas en medio citrato-fructosa-yema (con dosis de 1 ó 1.5 mg de proteína/106 espermatozoides), y 25% (p<0.05) en muestras congeladas en medio Bioxcell® (con dosis de 0.5 mg de proteína/106 espermatozoides). Conclusiones. Los resultados de esta investigación sugieren el posible uso de proteínas de bajo peso molecular del plasma seminal, para disminuir el efecto deletéreo de la criopreservación en los espermatozoide

Proteínas del plasma seminal de toros sanmartinero y cebú y su relación con la integridad de la membrana del espermatozoide sometido a procesos de criopreservación

y se pueden usar para revertir los efectos de la criopreservación en semen bovino. El objetivo de esta investigación fue determinar el efecto de adicionar proteínas del plasma seminal en la viabilidad espermática postdescongelación de semen de toros Sanmartinero y Cebú. Se obtuvo plasma seminal de 10 toros de cada raza y se determinaron los perfiles electroforéticos bidimensionales para establecer la relación entre la cantidad relativa de cada punto de proteína y los porcentajes de viabilidad espermática. Identificados los puntos que presentaron correlación con la viabilidad, se separó el plasma seminal en fracciones mediante cromatografiá de exclusión y aquellas que contenían las proteínas de interés se adicionaron a 1x106 descongelados e incubados a 37°C durante una hora. En plasma de Sanmartinero se detectó un punto de peso molecular 16.20 kDa y punto Isoeléctrico 5.5, que evidenció correlación con la viabilidad espermática (r=0.64 p0.001). Se uso la fracción cromatográfica 20-25, que contenía éste punto. La electroforesis bidimensional de la fracción 20-25, evidenció siete puntos (pesos moleculares de 14-16 kDa y puntos Isoeléctricos de 5.0 - 5.5). La incubación con esta fracción, demostró que el porcentaje de espermatozoides viables de toros Sanmartinero aumenta 20% (p0,05) con dosis de 1 y 1.5 mg/106 espermatozoides, congelados en medio citrato-fructosa y 25% (p0,05) con dosis de 0.5 mg/106 espermatozoides congelados en medio Bioxcell. Los resultados permiten sugerir el uso de proteínas del plasma seminal para disminuir el daño en los espermatozoides por la criopreservación. / Abstract. Some seminal plasma proteins are related to sperm viability and may be used to reverse the effects of cryopreservation on bull semen. The objective of this research was to determine the effect of add seminal plasma proteins in post-thaw sperm viability of Sanmartinero and Cebu bulls. Seminal plasma was obtained from 10 bulls of each breed and two-dimensional electrophoresis profiles. Seminal plasma was separated into fractions by size exclusion chromatography, and those containing the proteins of interest were added to 1x106 thawed and incubated at 37 ° C for one hour. In Sanmartinero plasma was detected one point (16.20 kDa molecular weight and isoelectric point 5.5), which correlated with the sperm viability (r = 0.64 p 0.001). 20-25 chromatographic fraction was used, which contained this point. Dimensional electrophoresis of fraction 20-25, show seven points (14-16 kDa molecular weight and isoelectric points of 5.0 - 5.5). The incubation with this fraction showed that the percentage of viable sperm from bulls Sanmartinero increases 20% (p 0.05) at doses between 1 and 1.5 mg/106 sperm frozen in citrate-fructose medium and 25% (p 0 , 05) with 0.5 mg/106 Bioxcell medium. Results suggest the use of seminal plasma proteins to reduce the sperm cryopreservation damage.Maestrí

Conservación seminal en toros Cebú. Efecto de la retirada del plasma seminal y su posterior incorporación sobre la calidad espermática en los protocolos de criopreservación

Los bovinos criollos colombianos Hartón del Valle considerados criollos caucanos se han caracterizado por ser animales de alta fertilidad con intervalos entre partos de 365-390 días y una tasa de natalidad superior al 90%. Igualmente se destacan por una gran precocidad alcanzando su pubertad a los 12 meses, la edad al primer servicio a los 22 meses y la edad al primer parto a los 32 meses. La precocidad del Hartón del Valle se ha visto reflejada también en pesos de destete de 180-200 kg a los 8 meses de edad. Si se les continúa con un sistema de manejo y alimentación adecuada alcanzan desarrollos y pesos significativos de 280 kilos en las hembras y 300 kilos en los machos a los 18 meses de edad, todo depende de las condiciones de manejo que aplique el productor para lograr alcanzar las metas satisfactorias.Una de las razas cebú más nombradas en Colombia en los últimos años es la Gyr, cuya capacidad de adaptabilidad a climas adversos la convierten en la de mayor potencial para la producción de leche en el trópico bajo del país. En el trópico la raza Gyr es de gran importancia en la industria lechera y es utilizada para generar la raza sintética Gyrolando (5/8 Holstein: 3/8 Gyr) con el propósito de tener animales con alta producción, tolerancia al calor y parásitos, (Ardila, 2010).Asocebú (Asociación colombiana de criadores de ganado cebú), señala que en el territorio nacional predominan las zonas cálidas y en esa situación no todos los animales soportan forrajes de inferior calidad y las altas temperaturas. Pero la cebuína se adapta a las condiciones climáticas del país en general, y por eso “ha sido seleccionada para mejorar la producción de leche con gran potencial en el trópico bajo”.La raza Gyr puede vivir en zonas altas, pero se ha desplazado a zonas por debajo de los 2.000 metros sobre el nivel del mar donde se ha descubierto que puede producir hasta 20 litros de leche al día con 4.0 % en grasa y 3.5 % en proteína. Con estos sólidos la leche de la Gyr se puede usar para el consumo como un producto fresco o para la fabricación de derivados. La finalidad del presente trabajo consistió en la determinación de los perfiles electroforéticos 1D SDS-PAGE, de las proteínas del plasma seminal (PS) de toros criollos Hartón del Valle y cebú Gyr, para establecer las correlaciones con las variables de calidad seminal para de ésta manera corroborar la existencia de algunas proteínas del PS presentes en la raza criolla y no en la raza Gyr, que son indispensables para la membrana espermática frente al choque frío. Se trabajó con 9 toros (4 toros criollos y 5 toros Gyr), a los cuales se les colectó el semen mediante electroeyaculación, con una pauta de un día por semana durante tres semanas. A cada uno de ellos se le realizaron tres recogidas. Cada uno de los eyaculados fue contrastado para determinar la calidad seminal, determinando concentración espermática, motilidad, viabilidad, células normales, integridad acrosómica y de membranas. Para la determinación de las proteínas del plasma seminal, éste se obtuvo por centrifugación refrigerada, a continuación, se le adicionó inhibidor de proteasas (PMSF), para finalmente ser congelado a -20ºC hasta el momento de su utilización. Las proteínas del plasma se separaron por electroforesis desnaturalizante SDS-PAGE.La concentración espermática superior que presentaron los toros criollos HV sobre los cebú Gyr (P Obtenidas las muestras, pasamos a valorar la incorporación del PS de toros criollos Hartón del Valle en los eyaculados de toros cebú Gyr lechero, para ello cada eyaculado se fraccionó en 3 alícuotas, sometidas a distintos tratamientos: control con su propio plasma seminal, retirada y adición del 25% y del 50% de PS respectivamente. La calidad seminal del control y de cada uno de los tratamientos fue valorada tanto en refrigeración a 1 y 24 horas, como después de la congelación. <br /

Integridad de la membrana citoplasmática en semen refrigerado y congelado de toros usando dos dilutores sintéticos

Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Zootecnia. Departamento Académico de Producción AnimalSe utilizaron cuatro toros de razas Simmental y Braunvieh (2 de cada raza) perteneciente a la Estación experimental Donoso del MINAGRI. Se extrajeron muestras de semen para su procesamiento (refrigeración y congelación) en el Banco Nacional de Semen evaluándose el efecto de los dilutores sintéticos Optixcell y Andromed sobre la integridad de la membrana citoplasmática. Se analizó la concentración espermática, pH, motilidad, vitalidad e integridad de la membrana citoplasmática usando solución hipoosmótica (100 mlOsm/L). Para el análisis estadístico se utilizó el paquete estadístico Minitab usando un diseño de bloques completamente al azar tomando como tratamientos a los dilutores y como bloques a cada raza de toro. Se aplicó un DBCA para las características motilidad, vitalidad y HOST espermáticos, para semen refrigerado y descongelado en ocho repeticiones. En la evaluación del semen puro se obtuvieron las medias 3.34±1.42 ml en volumen, 1442.40±327.34 millones de espermatozoides/ml de concentración, 3.8 de motilidad masal, 7 de pH y color blanco cremoso. En los resultados del ANOVA para el semen refrigerado; en la prueba de endosmosis (HOST) se obtuvo 48.97±15.23 % y 39.66±13.39% utilizando Andromed y Optixcell respectivamente encontrando diferencias significativas (P<0.05). En relación al semen descongelado se obtuvo 41.15±10.26% y 26.82±7.30% de endosmosis con Optixcell y Andromed respectivamente encontrándose también diferencias significativas (P<0.05). Por lo que se concluye que el dilutor Optixcell mejoró la conservación de la integridad de la membrana citoplasmática de espermatozoides. Con respecto a las razas, se encontró diferencias significativas (P<0.05) en la motilidad y vitalidad en semen refrigerado y descongelado. Sin embargo, en la prueba de HOST no se evidenció diferencias estadísticas (P≥0.05) tanto en semen refrigerado y descongelado.Four Simmental and Braunvieh bulls (2 of each breed) from the Donoso Experimental Station of MINAGRI were used. Semen samples were extracted for processing (refrigeration and freezing) at The National Sperm Bank and the effect of the synthetic dilutors Optixcell and Andromed on the integrity of the cytoplasmic membrane was evaluated. Sperm concentration, pH, motility, vitality and cytoplasmic membrane integrity were analyzed using hypoosmotic solution (100 mlOsm/L). For statistical analysis, the Minitab statistical package was used using a completely randomized block design with dilutors as treatments and each bull breed as blocks. A DBCA was applied for sperm motility, vitality and HOST characteristics, for refrigerated and thawed semen in eight replicates. In the evaluation of pure sperm, the means 3.34±1.42 ml in volume, 1442.40±327.34 million spermatozoa/ml of concentration, 3.8 of mass motility, 7 of pH and creamy white color were obtained. In the ANOVA results for the refrigerated semen; in the endosmosis test (HOST), 48.97±15.23 % and 39.66±13.39% were obtained using Andromed and Optixcell respectively, finding significant differences (P<0.05). In relation to the thawed sperm, 41.15±10.26% and 26.82±7.30% of endosmosis were obtained with Optixcell and Andromed respectively, also finding significant differences (P<0.05). Therefore, it is concluded that the Optixcell dilutor improved the conservation of the integrity of the cytoplasmic membrane of spermatozoa. With respect to the breeds, significant differences (P<0.05) were found in motility and vitality in refrigerated and thawed sperm. However, in the HOST test, no statistical differences (P≥0.05) were found in both refrigerated and thawed sperm

Las proteínas del plasma seminal incrementan la viabilidad espermática post-descongelación del semen de toros Sanmartinero

This study was performed to evaluate the effect of the addition of proteins on the postthawing viability of spermatozoa. Materials and methods. Spermatozoa were frozen with two different media: Citrate-fructose and Bioxcell. The isolation of seminal plasma proteins of low molecular weight was performed through low pressure liquid chromatography. It was determined that the proteins of interest eluted in fractions 21-25, and two dimensional electrophoresis was performed. Thawed sperm was incubated at 37°C for one hour with 0.5, 1, 1.5 and 2.0 mg of 21-25 fraction protein. Two additional treatments were included: one with seminal plasma total protein, and another one without protein. Results. Two dimensional electrophoresis of protein confirmed the presence of two bands of 14 and 16 kDa and seven spots with iso-electric points between 5.0 - 5.5 respectively. Incubation of the spermatozoa with the 21-25 fraction showed that sperm viability increases by 20% with doses of 1 and 1.5 mg of protein/106 spermatozoa in the citrate-fructose medium, and 25% with 0.5 mg of protein/106 spermatozoa in Bioxcell medium. A positive effect in sperm viability was demonstrated although it depends on the doses of protein and the cryopreservation medium used. Conclusions. This investigation suggests that the use of seminal plasma proteins can be useful for reducing the harmful effect on sperm cryopreservation.Objetivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la adición de proteínas del plasma seminal sobre el porcentaje de espermatozoides bovinos viables post-descongelación. Materiales y métodos. Los espermatozoides se congelaron usando dos medios (citrato-fructosa-yema y Bioxcell) y la obtención de proteínas de plasma seminal de bajo peso molecular se realizó por medio de cromatografía líquida de baja presión. Las proteínas de interés eluyeron en las fracciones 21-25 y se sometieron a electroforésis en una y dos dimensiones. Los espermatozoides se incubaron a 37°C durante una hora, con 0.5, 1.0, 1.5 y 2.0 mg de la fracción 21-25. Se incluyeron dos tratamientos adicionales: uno con proteínas totales del plasma seminal y otro sin proteína. Resultados. La electroforésis bidimensional de las fracciones confirmó la presencia de siete puntos de proteína de bajo peso molecular (14-16 kDa y punto Isoeléctrico de 5.0 - 5.5). La adición de estas proteínas aumentó 20% (p<0.05), el porcentaje de espermatozoides viables post-descongelación en muestras congeladas en medio citrato-fructosa-yema (con dosis de 1 ó 1.5 mg de proteína/106 espermatozoides), y 25% (p<0.05) en muestras congeladas en medio Bioxcell (con dosis de 0.5 mg de proteína/106 espermatozoides). Conclusiones. Los resultados de esta investigación sugieren el posible uso de proteínas de bajo peso molecular del plasma seminal, para disminuir el efecto deletéreo de la criopreservación en los espermatozoides